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基因漫游記
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基因編輯器:編出新生命
時(shí)間:2014-03-25 11:02:23 來(lái)源:轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)網(wǎng) 點(diǎn)擊:
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利用基因編輯器,人類(lèi)可以治療艾滋病?

細(xì)菌也有敵人,其最大的敵人之一是噬菌體,因?yàn)楹笳呖梢赃M(jìn)攻和吞食細(xì)菌。面對(duì)攻擊,細(xì)菌最有效的還擊是,“祭”出一種武器CRISPR,以保護(hù)自身。CRISPR有些拗口,稱(chēng)為規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù),實(shí)際上就是一種基因編輯器(又稱(chēng)為CRISPR-Cas9系統(tǒng)),是細(xì)菌用以保護(hù)自身對(duì)抗病毒的一個(gè)系統(tǒng),也就是一種對(duì)付攻擊者的基因武器。

初識(shí)基因編輯器

1987年,一個(gè)科學(xué)研究小組發(fā)現(xiàn),在一個(gè)細(xì)菌基因的一端有一個(gè)奇怪的重復(fù)序列,一個(gè)DNA序列緊跟著幾乎完全相同但以相反方向構(gòu)造的序列。這一現(xiàn)象當(dāng)時(shí)并未引起太多人的注意。過(guò)了10年,破譯微生物基因組的生物學(xué)家就經(jīng)常發(fā)現(xiàn)這類(lèi)令人費(fèi)解的DNA重復(fù)模式,因?yàn)檫@種重復(fù)模式出現(xiàn)在超過(guò)40%的細(xì)菌和90%的古生菌中。這種DNA的重復(fù)序列就是基因編輯器CRISPR。

到了2005年,有三個(gè)研究小組發(fā)現(xiàn),基因編輯器CRISPR可能與微生物的免疫作用有關(guān)。其中一個(gè)研究小組是馬里蘭州貝塞斯達(dá)市美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心的尤金·庫(kù)寧和其同事。他們發(fā)現(xiàn),基因編輯器能夠整合入侵的噬菌體(一種病毒)的少量基因,從而可以參考入侵者的基因來(lái)識(shí)別和攻擊入侵者,就像疫苗一樣發(fā)揮作用。

具體作用是,細(xì)菌和古生菌占據(jù)入侵的噬菌體的部分DNA,然后將其作為核糖核酸(RNA)分子(能阻止外來(lái)DNA的匹配)的一個(gè)模板保存起來(lái),就像真核細(xì)胞利用一個(gè)被稱(chēng)作核糖核酸干擾(RNAi)的系統(tǒng)來(lái)摧毀RNA一樣。簡(jiǎn)單地說(shuō),基因編輯器能模仿入侵者的基因以干擾入侵者的基因編碼,從而抗擊入侵者。

2007年,總部位于丹麥哥本哈根的食品添加劑公司——丹尼斯克公司(后被杜邦公司收購(gòu))的魯?shù)婪?middot;巴蘭格等人在研究中證明,他們通過(guò)添加或刪除和噬菌體DNA相匹配的間隔區(qū)DNA,改變了嗜熱鏈球菌對(duì)噬菌體攻擊的抵抗力。也就是說(shuō),通過(guò)基因編輯器可以增強(qiáng)細(xì)菌防御噬菌體的能力。細(xì)菌借助基因編輯器而使自己具備一種有高度適應(yīng)性的免疫系統(tǒng),使得它們能擊退來(lái)自某種噬菌體的多次進(jìn)攻。

當(dāng)然,基因編輯器更為現(xiàn)實(shí)的作用是,杜邦公司能夠?yàn)槭称飞a(chǎn)培育更強(qiáng)壯的菌株。因?yàn)槿槠窐I(yè)通常依靠細(xì)菌(諸如嗜熱鏈球菌)生產(chǎn)酸奶和乳酪,嗜熱鏈球菌能將牛奶中的乳糖分解為有刺激性的乳酸。但是,噬菌體能攻擊嗜熱鏈球菌,從而讓后者不能發(fā)揮作用,使得制造的酸奶或其他食物的質(zhì)量或數(shù)量遭受?chē)?yán)重?fù)p害。

到了2013年,研究人員對(duì)基因編輯器有了更多的了解,他們發(fā)現(xiàn),基因編輯器似乎是一種精確的萬(wàn)能基因武器,可以用來(lái)刪除、添加、激活或抑制其他生物體的目標(biāo)基因,這些目標(biāo)基因包括人、老鼠、斑馬魚(yú)、細(xì)菌、果蠅、酵母、線(xiàn)蟲(chóng)和農(nóng)作物細(xì)胞內(nèi)的基因,這也意味著基因編輯器是一種可以廣泛使用的生物技術(shù)。

新生命的誕生

利用基因編輯器,研究人員可以更為迅速地改變或刪除細(xì)胞中的多個(gè)基因,從而可以治療一些遺傳性疾病,例如亨廷頓氏病,甚至可以治療艾滋病等現(xiàn)在無(wú)法治愈的疾病。當(dāng)然,這一技術(shù)還以用于糾正體外受精胚胎的基因缺陷,如此,將可以創(chuàng)造新的健康生命,甚至創(chuàng)造“超人”。

現(xiàn)在,中國(guó)研究人員利用基因編輯器走在了創(chuàng)造新生命的前列。南京醫(yī)科大學(xué)生殖醫(yī)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、云南省靈長(zhǎng)類(lèi)生物醫(yī)藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和南京大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)利用基因編輯器,首次在全球創(chuàng)造和孕育了兩只靶向基因編輯猴。創(chuàng)造靶向基因編輯猴的目的是建立猴子疾病模型。由于人與猴有較大的相似性,因此可以用這樣的猴子來(lái)模擬人類(lèi),試驗(yàn)藥物和治療遺傳病,從而降低藥物研究和以人做試驗(yàn)的風(fēng)險(xiǎn)。

基因編輯器CRISPR可以對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行插入、刪除或重寫(xiě),類(lèi)似編輯對(duì)文字進(jìn)行編輯、刪改和插入一樣,是一種對(duì)物種基因進(jìn)行編輯加工的過(guò)程,由此不僅可以改變基因的功能,而且能創(chuàng)造新的生命。

研究人員先是給猴胚胎細(xì)胞注射定制的核糖核酸(RNA),然后把基因編輯器中的一種編輯工具DNA切割酶Cas9引導(dǎo)至期望的基因突變位點(diǎn),修改了3個(gè)基因。這三個(gè)基因分別是,調(diào)節(jié)代謝的基因Ppar-γ、調(diào)節(jié)免疫功能的基因Rag1和調(diào)節(jié)干細(xì)胞和性別決定的基因。研究人員在180多個(gè)單細(xì)胞期猴胚胎中同時(shí)靶向編輯了這3個(gè)基因,然后對(duì)15個(gè)胚胎的基因組進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有8個(gè)胚胎顯示出兩個(gè)靶基因同時(shí)突變的證據(jù)。這兩個(gè)基因就是調(diào)節(jié)代謝的基因Ppar-γ和調(diào)節(jié)免疫功能的基因Rag1。

此后,研究人員將這種經(jīng)過(guò)遺傳修飾的胚胎轉(zhuǎn)移到代孕母猴體內(nèi),其中一只母猴分娩出了一對(duì)孿生猴。對(duì)這對(duì)孿生猴的基因組進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),它們的DNA中確實(shí)存在兩個(gè)突變的靶基因。也因此把這兩只猴稱(chēng)為靶向基因編輯猴。

當(dāng)然,現(xiàn)在這兩只猴子還處于幼年期,尚無(wú)法驗(yàn)證是否經(jīng)過(guò)編輯的靶基因會(huì)產(chǎn)生作用,即是否會(huì)在猴子的代謝和免疫功能方面出現(xiàn)變化,而檢驗(yàn)這些功能需要等到3年后猴子成年時(shí)才能觀(guān)察到。

另一方面,人和動(dòng)物的一些生理功能和病理表現(xiàn)并非只是一兩個(gè)基因就能決定的,所以,在未來(lái)評(píng)估這種靶向基因編輯猴時(shí),還要評(píng)估和觀(guān)察其他基因是否有作用,而且要檢測(cè)是否靶向基因編輯猴的所有細(xì)胞中都有這種經(jīng)過(guò)編輯加工過(guò)的基因,如此才能完整地評(píng)價(jià)這種猴子的價(jià)值。

但不管怎樣,靶向基因編輯猴的誕生也提供了改變和修飾基因以治療疾病的一個(gè)新的方向。

前景廣闊

其實(shí),基因編輯器的原理比較明確,就是找到目標(biāo)基因并干擾這種基因的表達(dá),或讓這種基因處于沉默狀態(tài),不能表達(dá)。

在基因干擾的研究上,研究人員早就有類(lèi)似的發(fā)現(xiàn)。1990年,一個(gè)研究小組給矮牽?;ㄞD(zhuǎn)入一種催生紅色素的基因,希望這種轉(zhuǎn)基因矮牽?;ㄗ兂甚r紅色。但是,事與愿違,矮牽牛花不僅沒(méi)變成鮮紅色,反而完全褪色,花瓣變成了白色。這是為什么呢?

1998年美國(guó)科學(xué)家安德魯·法爾和克雷格·梅洛揭開(kāi)了其中的奧秘,原來(lái)是RNA(核糖核酸)干擾造成的。RNA過(guò)去被視為從DNA轉(zhuǎn)錄遺傳信息的“二傳手”,蛋白質(zhì)是根據(jù)RNA轉(zhuǎn)錄的信息來(lái)生產(chǎn)的,所以RNA只是一個(gè)信使。但是,法爾和梅洛發(fā)現(xiàn),RNA在轉(zhuǎn)達(dá)信息時(shí),有時(shí)是忠實(shí)傳遞信息,但有時(shí)會(huì)打折扣,從而使特定基因開(kāi)啟、關(guān)閉、更活躍或更不活躍,最終影響到生物的體型、外表、顏色和發(fā)育等。正是由于產(chǎn)生了RNA干擾,轉(zhuǎn)入矮牽?;ǖ募t色素基因沉默下來(lái),不能表達(dá),矮牽?;ň筒粫?huì)變成紅色。為此,法爾和梅洛共同獲得2006年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

利用RNA干擾可以讓一些致病基因沉默,以治療疾病,例如,RNA干擾可治愈實(shí)驗(yàn)鼠的肝炎。但是,RNA干擾是通過(guò)阻斷信使RNA(mRNA)來(lái)阻止蛋白質(zhì)生成,這時(shí)DNA的信息已經(jīng)轉(zhuǎn)錄到RNA中了,這如同馬已離廄,要進(jìn)行特定的干擾,已經(jīng)太晚。

但是,基因編輯器所進(jìn)行的干擾則是在DNA的信息還未轉(zhuǎn)錄到RNA之時(shí),也就是說(shuō)是在馬還未離廄時(shí)對(duì)目標(biāo)馬匹(目標(biāo)基因)的干擾。

更有意義的是,基因編輯器也需要RNA協(xié)同作用,因?yàn)镽NA可以為編輯器中的切割酶Cas9導(dǎo)向(所以基因編輯器又稱(chēng)為CRISPR-Cas9系統(tǒng)),引導(dǎo)其在特異位點(diǎn)裂解完整基因組,這個(gè)特異位點(diǎn)就是目標(biāo)基因的位點(diǎn),從而修改、修復(fù)目標(biāo)基因序列,或插入新的基因片段,以干擾目標(biāo)基因。

2013年3月,美國(guó)麻薩諸塞州總醫(yī)院的研究人員就利用基因編輯器創(chuàng)造出了變異的斑馬魚(yú)。不僅如此,基因編輯器還有可能讓作物生產(chǎn)更多更好的糧食產(chǎn)品。例如,中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所的高彩霞研究團(tuán)隊(duì)利用基因編輯器剔除了小麥中的致病基因,使小麥獲得了抗白粉病的抗性,為小麥的增產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。高彩霞研究團(tuán)隊(duì)還利用基因編輯器讓水稻中的4種基因保持沉默而失去功能,這也意味著基因編輯器可以用于改良中國(guó)人最重要的食糧——大米,讓其變得更有營(yíng)養(yǎng)或更高產(chǎn)。
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